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TUhjnbcbe - 2020/12/20 13:45:00
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高脂血症模型组的小鼠30天喂饲高脂饲料,肝组织切片与正常组对比,肝组织已严重脂肪变性。饲喂千两茶低、中、高剂量组的肝组织切片观察显示,千两茶茶汤对高脂血症小鼠肝脂肪变性具有较强的修复作用,有效减轻了由于高脂食物引起的小鼠肝细胞损伤。(图4)

图3 千两茶对高脂血症小鼠肝组织的影响

千两茶对体外诱导培养的非酒精性脂肪肝细胞的影响

(一)千两茶明显改善非酒精性脂肪肝细胞脂肪堆积

人肝LO2细胞汇合率达80-90%时按照1:5的比例传代,取对数生长期的细胞,更换新鲜培养基后,在培养基中加入含1.0ml/L脂肪乳的胎牛血清,继续培养48h至出现细胞内脂滴或泡沫样物沉积,即制成脂变肝细胞模型。镜像比较造模前后细胞内的脂滴变化,组织学上低镜下每单位面积见1/3以上的干洗白脂肪变性和脂肪堆积,无其他明显组织学改变。造模成功后,再更换新培养基,在培养基中加入含ug/mL千两茶提取粉的胎牛血清,继续培养48h,即为试验组。阳性药组加入含ug/mL血脂康的胎牛血清培养48h。模型组给予无药物的培养基继续培养48h,最后将细胞油红O染色,拍照观察。

图4 肝LO2细胞油红O染色图片

从油红O染色情况看模型组细胞内呈现明显的红色脂滴。加入血脂康(ug/mL)和千两茶(ug/mL)孵育48h,细胞鸎红色脂滴明显减少。人肝癌细胞株(HepG2)较好的保留了肝细胞的多种生物学特征,具有和人类肝脏相似的代谢能力,是体外研究粮脂代谢的典型细胞。将HepG2细胞培养于5%Co、37摄氏度环境中,培养基为含10%胎牛血清的低糖(1g/L)DMEM。当70%-80%融合度时,经0.25%胰酶消化后分散成5x/L细胞悬液,接种于细胞培养板。HepG2细胞以含10%胎牛血清的高糖(4.5g/L)DMEM继续培养48h造模。造模成功后,再更换新培养基,加入含ug/mL千两茶提取粉的高糖DMEM,继续培养48h,即为试验组。正常组、造模组分别给予无药物的低糖、高糖培养基继续培养48h,弃培养基,PBS洗2次,收集细胞。将细胞超声波裂解,直到细胞悬液澄清,按照试剂盒操作测定吸光度,计算甘油三酯(TG)含量。

注:“★”表示同一列各组与模型组比较在P0.05水平差异显著,“★★”表示在P0.01水平差异显著;“#”表示与正常对照组比较在P0.05水平差异显著,“##”表示在P0.01水平差异显著。

与正常组比较,造模组在48小时处理后,HepG2的TG含量升高呈现极显著水平(P0.01)。而HepG2细胞接受千两茶干预48小时后,TG含量极显著降低(p0.01),并且与正常组无明显差异,说明千两茶具有显著的降血脂功效。

胞外转氨酶的升高程度反映了肝细胞膜的损伤程度。从表5和表6可知,造模组与正常组比较,上清液中的ALT、AST的量均极显著升高,说明肝细胞膜操作严重,而千两茶组和阳性药物组对培养上清液中ALT、AST活性影响显著,表现出对肝细胞膜损伤有很好的修复能力。

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“安化黑茶”

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